Порошкообразная культуральная среда DMEM

DMEM разработан на основе среды MEM. По сравнению со средой МЕМ содержание аминокислот увеличилось в 2 раза, а содержание витаминов увеличилось в 4 раза. В то же время были добавлены заменимые аминокислоты, следовые количества ионов железа и пируват натрия. Среда DMEM первоначально была разработана с содержанием глюкозы 1000 мг/л (тип с низким содержанием сахара), а позже была разработана среда с содержанием глюкозы 4500 мг/л (тип с высоким содержанием сахара), которая широко использовалась при культивировании различных клеток. Культуральная среда с высоким содержанием глюкозы широко используется в быстрорастущих клетках с низкой адгезией, клетках гибридомной миеломы, клонированных клетках, ДНК-трансфицированных трансформированных клетках, клетках-хозяевах различных первичных вирусов, культурах отдельных клеток и в производстве вакцин, таких как экспрессия клеток СНО Производство вакцин ЭПО и гепатита В. Среда с низким содержанием глюкозы больше подходит для культивирования клеток с более медленным метаболизмом, зависящих от адгезии. Среда без глюкозы может регулировать концентрацию глюкозы по желанию в соответствии с потребностями исследования, что удобно и быстро. DMEM не содержит белков, липидов или факторов роста. Следовательно, DMEM необходимо дополнять питательными веществами, обычно 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS). В DMEM используется буферная система с бикарбонатом натрия (3.7 г/л), поэтому для поддержания физиологического pH требуется среда с 5-10% CO2. Для широкого спектра применений клеточных культур мы предлагаем модифицированные среды DMEM с различными компонентами, а также среды DMEM с настраиваемыми компонентами.

Ингредиенты порошкообразной культуральной среды DMEM

Эту среду для культивирования клеток в виде сухого порошка DMEM необходимо дополнить бикарбонатом натрия, отрегулировать рН и отфильтровать во время приготовления. Подробная формулировка выглядит следующим образом:

1. Добавьте 950 мл дистиллированной воды в сосуд для смешивания как можно ближе к конечному объему.
2. Добавьте сухую порошкообразную среду в воду комнатной температуры (от 15°C до 30°C) и осторожно перемешайте. Не нагревайте воду.
3. Промойте внутреннюю часть упаковки, чтобы удалить остатки порошка.
4. Добавьте 50 мл раствора NaHCO75 с концентрацией 3 г/л в культуральную среду.
5. Отрегулируйте pH на 0.2–0.3 единицы ниже желаемого конечного рабочего pH, медленно добавляя и перемешивая 1 н. NaOH или 1 н. HCl. После фильтрации pH может повышаться на 0.1–0.3 единицы. Рекомендуемый рабочий рН 7.0-7.4.
6. Используйте дистиллированную воду, чтобы отрегулировать окончательный объем.
7. Немедленно обработайте культуральную среду через фильтрующую мембрану 0.2 мкм в стерильные контейнеры, используя систему фильтрации под положительным давлением.