Порошкообразная минимальная эссенциальная среда (MEM)

RPMI-1640 представляет собой улучшенную среду McCoy's 5A и обладает уникальным эффектом по сравнению с другими средами, поскольку содержит восстанавливающий агент глутатион и высокую концентрацию витаминов. RPMI 1640 содержит биотин, витамин B12 и PABA, которых нет в MEM и DMEM Eagle. Кроме того, среда содержит очень высокие концентрации витаминов инозитола и холина. Было обнаружено, что среда RPMI 1640 подходит для различных клеток млекопитающих, включая клетки HeLa, клетки jurkat, клетки MCF-7, клетки PC12, клетки PBMC, астроциты и раковые клетки. Это одна из наиболее широко используемых сред. RPMI 1640 среда не содержит белков, липидов или факторов роста. Поэтому в качестве добавки обычно требуется 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (FBS). В RPMI 1640 используется буферная система с бикарбонатом натрия (2.0 г/л), поэтому для поддержания физиологического pH требуется среда с содержанием 5–10 % CO2. Для широкого спектра применений с клеточными культурами мы предлагаем модифицированную среду RPMI 1640 с различными компонентами и среду RPMI 1640 с настраиваемыми компонентами.

Состав порошкообразной среды RPMI-1640 Medium

Эту сухую порошковую среду RPMI-1640 необходимо дополнить бикарбонатом натрия, отрегулировать pH и отфильтровать при приготовлении. Подробный метод формулировки выглядит следующим образом:

1. Добавьте 950 мл дистиллированной воды в сосуд для смешивания как можно ближе к конечному объему.
2. Добавьте сухую среду к воде комнатной температуры (от 15°C до 30°C) и осторожно перемешайте. Не нагревайте воду.
3. Промойте внутреннюю часть упаковки, чтобы удалить остатки порошка.
4. Добавьте в среду 29.3 мл раствора NaHCO75 с концентрацией 3 г/л.
5. Отрегулируйте pH на 0.2–0.3 единицы ниже желаемого конечного рабочего pH, медленно добавляя и перемешивая 1 н. NaOH или 1 н. HCl. После фильтрации pH может повышаться на 0.1–0.3 единицы. Рекомендуемый рабочий рН 7.1-7.4.
6. Отрегулируйте окончательный объем дистиллированной водой.
7. Немедленно обработайте среду через функцию мембранной фильтрации 0.2 мкм фильтра в стерильный контейнер, используя систему положительного давления.