Культуральная среда MEM (минимальная необходимая среда)

Культуральная среда MEM (минимальная основная среда) также называется минимальной основной средой, минимальной основной средой или слабо ограниченной средой Игла. Он разработан Гарри Иглом на основе базовой среды Eagle (BEM). Это один из самых основных и применимых средних с самым широким диапазоном. Это одна из наиболее часто используемых сред в культуре клеток животных, включая HeLa, BHK-21, 293, HEP-2, HT-1080, McF-7, фибробласты и первичные астроциты крысы. Культуральная среда МЕМ содержит только 12 незаменимых аминокислот, глютамин и 8 витаминов. Он прост по составу и в основном используется для культивирования прикрепившихся клеток. После модификации формулы его также можно использовать для культивирования других типов клеток.

Ингредиенты культуральной среды MEM

L-глютамин (глютамин)

L-глютамин (глютамин) является важным питательным элементом в клеточной культуре, но он нестабилен в растворе и самопроизвольно разлагается. Количество L-глютамина можно произвольно регулировать в соответствии с потребностями исследования среды без L-глютамина, а добавление свежего L-глютамина или его заменителей во время использования более полезно для роста клеток.

L-аланил-L-глутамин (Ala-Glu), также известный как аланил-глутамин и аланил-глутамилдипептид, представляет собой передовую добавку для культивирования клеток, которая может напрямую заменить L-глутамин в среде для культивирования клеток. L-глютамин является важным питательным веществом в клеточной культуре, но он нестабилен в растворе и будет, однако, нестабилен в растворе и спонтанно разлагается с образованием аммиака и пироглутаминовой кислоты, из которых аммиак вреден для клеток, тогда как L-аланил- L-глютамин очень стабилен в водном растворе и самопроизвольно не разлагается. Механизм утилизации клеток заключается в том, что во время культивирования клетки постепенно высвобождают пептидазу в культуральную среду для гидролиза L-аланил-L-глутамила в L-аланин и L-глутамин, а затем клетки поглощают и утилизируют эти два гидролиза. товары. Процесс клеточного использования L-аланил-L-глутамила подобен стратегии культивирования с добавлением потока в том, что низкие уровни L-глутамина постоянно добавляются в культуральную среду, тем самым увеличивая использование L-глутамина без образования избытка. аммиак, который способствует росту клеток. L-аланил-L-глутамил может заменить эквимолярный L-глутамин, подходит для всех клеток, требует небольшой адаптации и может увеличить время культивирования клеток. Это также может увеличить время культивирования клеток и уменьшить количество пассажей, что экономит время и деньги. Клетки, культивированные в среде с добавлением L-глутамина, показали более медленное снижение активности, чем клетки, культивированные в среде с добавлением L-глутамина. Несколько более длительный период задержки обусловлен временем, необходимым для высвобождения пептидазы и переваривания дипептида.

NEAA (заменимые аминокислоты)

NEAA (заменимые аминокислоты), которые представляют собой 7 NEAA из L-аланина, L-глутаминовой кислоты, L-аспарагина, L-аспарагиновой кислоты, L-пролина, L-серина и глицина, добавленные в среду MEM, могут уменьшить побочные эффекты. эффекты собственного производства клетками заменимых аминокислот во время культивирования клеток и эффективно способствуют клеточной пролиферации и метаболизму.

Глюкозу можно регулировать по желанию в соответствии с потребностями исследования, что удобно и быстро. Среда с высоким содержанием сахара обычно используется для быстрорастущих клеток с низкой адгезией, миеломных клеток гибридомы, клональных клеток, трансформированных клеток трансфекции ДНК, различных первичных вирусных клеток-хозяев, культуры одиночных клеток и производства вакцин, таких как использование Клетки СНО для экспрессии ЭПО и производства вакцины против гепатита В. Среда с низким содержанием сахара больше подходит для культивирования медленно метаболизирующихся адгезивно-зависимых клеток.

HEPES — отличный биологический буфер, не оказывающий токсического действия на клетки. Среда с HEPES может поддерживать постоянный диапазон pH в течение более длительного периода времени, что может эффективно предотвратить неблагоприятное влияние на рост клеток больших колебаний pH культуральной среды. Его можно использовать в инкубаторах без CO2.

Феноловый красный используется в качестве индикатора pH в культуральной среде для постоянного контроля pH культуральной среды. Феноловый красный делает культуральную среду желтой при низком рН, пурпурной при более высоком рН и красной при рН 7.2–7.4, что наиболее подходит для культивирования клеток. Однако феноловый красный имеет и некоторые недостатки. Исследования показали, что феноловый красный может имитировать эффекты стероидных гормонов (особенно эстрогена), поэтому при использовании чувствительных к эстрогену клеток (таких как ткань молочной железы) лучше всего использовать среду без фенолового красного. Феноловый красный может мешать обнаружению во время проточного цитометрического анализа. Кроме того, присутствие фенолового красного в некоторых составах сред без сыворотки может нарушать баланс натрия и калия.

Пенициллин-стрептомицин раствор

Раствор пенициллин-стрептомицин, также обычно называемый «двойными антибиотиками», является наиболее часто используемым антибиотиком в культуре in vitro для предотвращения микробного загрязнения, при котором пенициллин препятствует синтезу клеточной стенки бактерий и особенно эффективен против грамположительных бактерий, в то время как стрептомицин ингибирует синтез бактериального белка путем связывания с 30S-субъединицей бактериальной рибосомы и особенно эффективен против стрептомицина. но особенно эффективен против грамотрицательных бактерий. Комбинация пенициллина и стрептомицина может предотвратить большую часть бактериального заражения.

Этот продукт содержит аминокислоты, витамины, неорганические соли и многие другие компоненты, необходимые для мультикультивирования клеток, но не содержит белков, липидов или каких-либо факторов роста, поэтому продукт следует использовать с добавками сыворотки или бессывороточными добавками.

Предостережения

Этот продукт был отфильтрован и обеззаражен, и его следует использовать с осторожностью в асептических условиях во избежание загрязнения.
Не замораживайте и не размораживайте продукт, чтобы обеспечить его наилучшее использование.
Этот продукт предназначен только для научных исследований или дальнейшего изучения, а не для диагностики или лечения.