Виды ПЦР (полимеразная цепная реакция)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это универсальный метод молекулярной биологии, используемый для амплификации определенных последовательностей ДНК или РНК. За прошедшие годы были разработаны различные типы ПЦР для удовлетворения различных исследовательских и диагностических потребностей. Вот некоторые распространенные типы ПЦР:

1. Обычная ПЦР: Это стандартный метод ПЦР, включающий циклы денатурации, отжига и удлинения. Он используется для общей амплификации ДНК, секвенирования и клонирования.
2. ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР): RT-PCR используется для амплификации РНК в комплементарную ДНК (кДНК) и часто используется для изучения экспрессии генов. Два распространенных варианта включают количественную RT-PCR (qRT-PCR) для количественного определения уровней РНК и вложенную RT-PCR для повышения чувствительности.
3. ПЦР в реальном времени (кПЦР): ПЦР в реальном времени позволяет количественно определять ДНК или РНК во время процесса амплификации. Он широко используется для анализа экспрессии генов, количественной оценки вирусной нагрузки и генотипирования.
4. Мультиплексная ПЦР: Мультиплексная ПЦР амплифицирует несколько целевых последовательностей за одну реакцию. Это ценно для обнаружения нескольких патогенов или одновременного генотипирования нескольких локусов.
5. Вложенный ПЦР: Вложенная ПЦР включает два раунда амплификации, где продукт первой ПЦР служит матрицей для второй. Он используется для повышения специфичности и чувствительности, особенно при работе с деградированной или малокопийной ДНК.
6. Горячий старт ПЦР: В ПЦР с горячим стартом используются модифицированные ДНК-полимеразы, которые неактивны при более низких температурах. Это предотвращает неспецифическую амплификацию на начальных этапах ПЦР и особенно полезно при работе со сложными шаблонами.
7. Высокоточная ПЦР: В высокоточной ПЦР используются ДНК-полимеразы с возможностью корректуры, чтобы минимизировать ошибки во время репликации ДНК. Это важно для таких приложений, как секвенирование и клонирование ДНК.
8. Цифровая ПЦР (дПЦР): Цифровая ПЦР разделяет образец на тысячи крошечных реакций, позволяя провести абсолютную количественную оценку целевых молекул ДНК или РНК. Он отличается высокой точностью и используется для обнаружения и количественного определения редких аллелей.
9. Обратный ПЦР: Обратная ПЦР амплифицирует фрагменты ДНК с известными последовательностями на концах, что делает ее полезной для изучения неизвестных областей, фланкирующих известные последовательности.
10. ПЦР колоний: ПЦР колоний используется для проверки бактериальных колоний на наличие определенных фрагментов ДНК, часто после экспериментов по клонированию.
11. ПЦР с перекрывающимся расширением (сплайсинг с помощью перекрывающегося расширения или SOE-PCR): SOE-PCR используется для создания химерных молекул ДНК или проведения сайт-направленного мутагенеза путем соединения фрагментов ДНК с перекрывающимися последовательностями.
12. Асимметричная ПЦР: Асимметричная ПЦР использует избыток одного праймера для предпочтительной амплификации одной цепи целевой ДНК. Он используется при секвенировании ДНК и генотипировании.

Это лишь некоторые из множества доступных специализированных методов ПЦР, каждый из которых адаптирован к конкретным исследовательским или диагностическим требованиям. Исследователи выбирают подходящий тип ПЦР в зависимости от характера своего проекта и информации, которую они стремятся получить.