Полимеразная цепная реакция, распространенные ферменты ПЦР

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это метод, обычно используемый для амплификации молекул ДНК in vitro, и ферменты ПЦР являются ключевым компонентом этой реакции. Основные типы ферментов ПЦР включают Taq-полимеразу, Pfu-полимеразу и варианты Taq с горячим стартом. ДНК-полимераза.

Taq-полимераза

Taq-полимераза была одним из первых ферментов ПЦР, получивших широкое распространение. Он был выделен из бактерии, известной как Thermus aquaticus, и обладает превосходной термостойкостью. Taq-полимераза стабильна при высоких температурах и подходит для стадий денатурации, отжига и удлинения ПЦР. Однако Taq-полимераза имеет высокий уровень ошибок в регионах с высоким содержанием GC, поскольку у нее отсутствует функция коррекции экзонуклеации 3'-5'.

Пфу-полимераза

Полимераза Pfu выделена из термофильных цианобактерий и превосходит по термостойкости полимеразу Taq. Он имеет функцию коррекции экзонуклеотидов 3'-5', поэтому имеет меньшую частоту ошибок и генерирует более точные продукты амплификации при амплификации областей с высоким содержанием GC.

Варианты ДНК-полимеразы Taq с горячим стартом

Поскольку Taq-полимеразу необходимо активировать при более высоких температурах, в начале реакции ПЦР могут образовываться неспецифические продукты. Чтобы решить эту проблему, были введены ферменты ПЦР с горячим стартом, включая неактивный вариант при низких температурах и активируемый при высоких температурах. Это помогает уменьшить образование неспецифических продуктов на ранних стадиях реакции ПЦР, тем самым повышая специфичность.

Поскольку Taq-полимеразу необходимо активировать при более высоких температурах, в начале реакции ПЦР могут образовываться неспецифические продукты. Чтобы решить эту проблему, были введены ферменты ПЦР с горячим стартом, включая неактивный вариант при низких температурах и активируемый при высоких температурах. Это помогает уменьшить образование неспецифических продуктов на ранних стадиях реакции ПЦР, тем самым повышая специфичность.