Процесс экстракции нуклеиновой кислоты
Экстракция нуклеиновой кислоты — фундаментальный шаг в молекулярной биологии и диагностическом тестировании, позволяющий исследователям и медицинским работникам изолировать ДНК или РНК из различных биологических образцов для последующего анализа. Вот обзор процесса экстракции нуклеиновых кислот:
Сбор образцов: Процесс начинается со сбора биологических образцов, содержащих целевые нуклеиновые кислоты. Образцы могут включать кровь, ткани, слюну, мазки, мочу или другие жидкости организма, в зависимости от конкретного применения.
Образец лизиса: Собранные образцы лизируются, чтобы вскрыть клетки и высвободить нуклеиновые кислоты. Буферы для лизиса, содержащие детергенты, хаотропные агенты или ферменты, обычно используются для разрушения клеточных мембран и расщепления белков, обеспечивая доступ к нуклеиновым кислотам.
Связывание нуклеиновой кислоты: Как только нуклеиновые кислоты попадают в лизат, их необходимо избирательно связать с твердофазной матрицей, такой как кремнеземные мембраны или магнитные шарики. Выбор связывающей матрицы зависит от таких факторов, как тип образца, тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) и последующие применения.
Стирка: После связывания твердофазную матрицу промывают для удаления таких загрязнений, как белки, липиды и другие клеточные остатки. Этапы промывки помогают очистить нуклеиновые кислоты и снизить фоновый шум при последующих анализах.
Элюирование: Очищенные нуклеиновые кислоты затем элюируются из твердофазной матрицы с использованием буфера с низким содержанием соли или воды. Элюция высвобождает нуклеиновые кислоты в чистый раствор, готовый для дальнейших применений, таких как ПЦР (полимеразная цепная реакция), секвенирование или другие молекулярные анализы.
Контроль качества: Экстрагированные нуклеиновые кислоты могут подвергаться контролю качества для оценки их концентрации, чистоты и целостности. Общие методы количественного определения включают УФ-спектроскопию (например, с использованием спектрофотометра) или флуорометрию (например, с использованием анализа на основе флуоресценции). Чистоту часто оценивают путем измерения коэффициента поглощения при определенных длинах волн (например, соотношения A260/A280 для ДНК или соотношения A260/A230 для РНК). Целостность можно оценить с помощью гель-электрофореза или капиллярного электрофореза.
Память: Очищенные нуклеиновые кислоты можно хранить при соответствующих температурах (-20°C или -80°C) для краткосрочного или длительного хранения, в зависимости от предполагаемого использования и требований к стабильности.
Важно отметить, что протоколы экстракции нуклеиновых кислот могут различаться в зависимости от конкретного типа образца, желаемого типа нуклеиновой кислоты, последующих применений и доступного оборудования или наборов. Исследователи и персонал лабораторий часто оптимизируют протоколы экстракции для достижения высоких выходов, чистоты и целостности извлеченных нуклеиновых кислот для надежного последующего анализа. Кроме того, подходы, основанные на автоматизации и наборах, становятся все более распространенными для оптимизации и стандартизации процесса экстракции, особенно в лабораторных условиях с высокой производительностью.

Процесс выделения нуклеиновой кислоты вируса гриппа
Процесс экстракции нуклеиновых кислот вируса гриппа обычно аналогичен обычному экстракции нуклеиновых кислот, но с некоторыми особыми соображениями для вируса и обрабатываемых образцов. Вот обзор процесса экстракции нуклеиновых кислот вируса гриппа:
Сбор проб: мазки из носоглотки, смывы из носа, мазки из зева или выделения из дыхательных путей обычно собираются у лиц с подозрением на инфекцию гриппа.
Инактивация образцов. Чтобы обеспечить биобезопасность и предотвратить передачу вируса, собранные образцы можно обработать соответствующим буфером для инактивации вируса или подвергнуть термической обработке, чтобы сделать вирус неинфекционным, сохраняя при этом нуклеиновые кислоты для экстракции.
Лизис образцов: инактивированные образцы лизируются для высвобождения вирусной РНК. Буферы для лизиса, содержащие детергенты, хаотропные агенты или ферменты, используются для разрушения вирусных оболочек и высвобождения вирусных нуклеиновых кислот.
Связывание нуклеиновой кислоты: после лизиса вирусная РНК избирательно связывается с твердофазной матрицей, такой как кремнеземные мембраны или магнитные шарики, посредством процесса, который обычно включает хаотропные соли и этанол. Этот шаг позволяет очистить и сконцентрировать вирусную РНК.
Промывка. Твердофазную матрицу, содержащую связанную вирусную РНК, промывают для удаления примесей, таких как белки, клеточный мусор и ингибиторы, которые могут помешать дальнейшему применению.
Элюирование: Очищенную вирусную РНК элюируют из твердофазной матрицы с использованием буфера с низким содержанием соли или воды. При элюировании вирусная РНК высвобождается в чистый раствор, готовый к дальнейшему анализу, например, полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) для обнаружения и характеристики вируса гриппа.
Контроль качества. Извлеченная вирусная РНК может подвергаться этапам контроля качества для оценки ее концентрации, чистоты и целостности с использованием таких методов, как УФ-спектроскопия, флуорометрия или RT-PCR.
Хранение: Очищенную вирусную РНК можно хранить при соответствующих температурах (-20°C или -80°C) для краткосрочного или длительного хранения, в зависимости от предполагаемого использования и требований к стабильности.
Важно отметить, что процесс выделения нуклеиновой кислоты вируса гриппа может варьироваться в зависимости от таких факторов, как конкретный тип образца, вирусная нагрузка, используемый метод обнаружения и доступное оборудование или наборы. Кроме того, следует строго соблюдать меры биобезопасности, чтобы предотвратить передачу вируса во время обработки проб. Платформы для автоматизированной экстракции и коммерческие наборы для экстракции, специально разработанные для обнаружения вируса гриппа, обычно используются для оптимизации и стандартизации процесса экстракции в клинических и исследовательских лабораториях.