ДНК-полимераза Pfu, сокращенно Pfuase, является одной из наиболее часто используемых высокоточных ДНК-полимераз. ДНК-полимераза HCY™ Pfu представляет собой высокотермостабильную ДНК-полимеразу, полученную из термофильной бактерии Pyrococcus Furiosus, которая была модифицирована путем мутации и рекомбинации, чтобы иметь более высокую термическую стабильность и эффективность амплификации, чем ДНК-полимераза Pfu дикого типа. Молекулярная масса фермента Pfu составляет 90 кДа. Фермент Pfu обладает 5'-3'-ДНК-полимеразной активностью и 5'-3'-экзонуклеазной активностью. Молекулярная масса Pfu составляет 90 кДа. Фермент Pfu обладает 5'-3'-ДНК-полимеразной активностью и 5'-3'-экзонуклеазной активностью, а продукты ПЦР имеют гладкие концы, которые можно непосредственно использовать для клонирования с плоскими концами.
Поскольку Pfu обладает экзонуклеазной активностью от 3' до 5', вероятность ошибки во время ПЦР-амплификации значительно снижается, а точность в 10 раз выше, чем у Taq ДНК-полимеразы. Частота ошибок Pfu намного ниже, чем Taq, но также ниже, чем у некоторых других ДНК-полимераз высокой точности, таких как Vent, DeepVent, Pwo, Tli и т. д. Поэтому Pfu часто является первым выбором среди ДНК-полимераз высокой точности. Поэтому Pfu часто отдают предпочтение как экономичной и высококачественной ДНК-полимеразе. ДНК-полимераза HCY™ Pfu обладает высокой эффективностью амплификации и высокой скоростью амплификации (4 кб/мин, в 8 раз быстрее, чем обычный фермент Pfu), что устраняет недостатки низкой эффективности амплификации обычного фермента Pfu, низкого выхода и медленной скорости амплификации, а также значительно сокращает время реакции.
Источник
ДНК-полимераза HCY™ Pfu представляет собой рекомбинантную ДНК-полимеразу Pfu, которая генетически модифицирована путем мутации и рекомбинации и очищена путем экспрессии в E. coli.
Пользы
Высокоточная ПЦР, точечная мутация, клонирование ПЦР с двойным плоским концом и так далее.
Фрагменты ДНК, амплифицированные ферментом Pfu, имеют двойные плоские концы, которые можно использовать для двойного клонирования с плоскими концами, но не для обычного клонирования Т-вектора.
dUTP и dITP или праймеры, содержащие dUTP и dITP, не могут использоваться в реакциях амплификации ПЦР, опосредованной ферментом Pfu.
Определение активации
Используя активированную ДНК спермы лосося в качестве матрицы/праймера, активность 10 нмоль целых нуклеотидов, проглоченных в нерастворимом в кислоте виде, определяли как 1 единицу активности (Е) при 74°C в течение 30 минут.
Характеристики ДНК-полимеразы HCY™ Pfu
Длина фрагментов амплификации ДНК-полимеров HCY™ pfu
HCY™ pfu DNA Polymeras может с высокой эффективностью амплифицировать фрагменты 0.5 КБ/1 КБ/2 КБ/5 КБ различной длины λДНК (0-5 КБ).
Амплификация фрагмента E. coli длиной 300 п.н. с добавлением матрицы в концентрации 0 пг/10 пг/100 пг/1 нг/10 нг/100 нг; видно, что этот продукт может амплифицировать гены E. coli всего в 1 нг количества матрицы.
NC означает отрицательный контроль для амплификации ДНК-полимеразы HCY™ Pfu без матрицы.
М означает ДНК-маркер DL500.
Скорость амплификации ДНК-полимеров HCY™ Pfu
Время продления составляло 30 с/60 с/120 с. для амплификации целевых фрагментов размером 0.5 КБ/1 КБ/2 КБ/5 КБ;
Видно, что время продления 30 сек. и 120 сек. может хорошо амплифицировать фрагменты ДНК размером 2 т.п.н. и 5 т.п.н. соответственно, что указывает на то, что реакционная система ПЦР с ДНК λ в качестве матрицы может устанавливать время удлинения в соответствии с 3 т.п.н./мин.
Отсутствие экзогенной нуклеазной активности, экзогенной эндонуклеазы и загрязнения экзонуклеазой;
Отсутствие экспрессии остатка нуклеиновой кислоты хозяина.
Меры предосторожности: Этот продукт предназначен только для научных исследований и не может использоваться для медицинских или диагностических процедур на людях или животных, а также в качестве продуктов питания, косметики или товаров для дома. Без письменного разрешения, авторизации или одобрения этот продукт нельзя производить, лицензировать для продажи, продавать, импортировать или экспортировать, а также использовать все соответствующие патенты и товарные знаки продукта.
Что взять с собой
Cat. No.
наименование товара
Упаковка
Э0090П01
ДНК-полимераза HCY™ Pfu
500 ЕД/трубка
Э0090Б01
10×HCY™ Pfu Buffer (с Mg2+)
1 мл / туба
–
Ручная
1pc
Условия хранения
Для длительного хранения храните при температуре -20℃ в защищенном от света месте. Если требуется частое использование, его можно разделить и хранить при температуре 4 ℃, чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания. После оттаивания его следует хорошо перемешать, чтобы избежать образования большого количества пузырьков воздуха.
«HCY, Здравоохранение для вас» — наша вечная миссия. Мы стремимся предлагать безопасные и надежные продукты и медицинские услуги с нашими надежными партнерами по всему миру. HCY уже поставляла ВОЗ, клинику MAYO, MGI, DDC, Йельский университет, Qorvo, Quanterix, Thomas Scientific, биосенсор SD, Cardinal Health, Cleveland Clinic, Mars Petcare & LumiraDx и т. д. в последние годы.
Вы можете запросить коммерческое предложение или отправить заказ.
Мы ответим вам по электронной почте в течение 24 часов
HCY™ Taqman qPCR Master Mix (2×) подходит для обнаружения качественных и количественных реакций ПЦР в реальном времени с использованием зондового метода.
ДНК-полимераза HCY™ Taq была модифицирована путем мутации и рекомбинации, чтобы обеспечить более высокую термическую стабильность и эффективность амплификации, чем у дикого типа...