Знакомство с классическими средами для культивирования клеток, как выбрать среду?

Наиболее широко используются многие виды классических сред для культивирования клеток, такие как DMEM, RPMI 1640, MEM и DMEM/F12. Другие, такие как среда M199, IMDM и L15, также используются для культивирования определенных клеток. Характеристики и области применения этих сред для культивирования клеток следующие.

1. Среда для культивирования клеток BME

Базовая среда Игла была разработана Иглом в 1955 году и содержит BSS + 12 видов аминокислот + глютамин + 8 видов витаминов. Он прост, легко добавляется и подходит для различных пассированных клеточных линий и специального исследовательского использования, на основе которого улучшенными вариантами среды для культивирования клеток являются MEM, DMEM, IMDM и т. д.

2. Среда для культивирования клеток MEM

Это улучшено в основной среде Игла (BME) в 1959 году, лизин и биотин были удалены, а концентрация аминокислот была увеличена. Однако из-за ограниченного содержания питательных веществ это не обязательно лучшая среда для выращивания специфических культур клеток.

3. Среда для культивирования клеток DMEM

DMEM представляет собой среду Игла, модифицированную Дульбекко, первоначально разработанную для мышиных фибробластов. DMEM имеет вдвое большую концентрацию аминокислот, чем MEM, в четыре раза большую концентрацию витаминов, чем MEM, и использует двойную концентрацию HCO3- и CO2 для лучшей буферизации. Первоначальный состав содержал 1000 мг/л глюкозы, которая позже была доведена до 4500 мг/л для роста определенных клеток, часто называемых низкими и высокими уровнями глюкозы.

Низкий уровень сахара подходит для культуры зависимых адгезивных клеток, особенно для культуры опухолевых клеток с высокой скоростью роста и плохой адгезией. Высокий уровень сахара больше подходит для суспензионной культуры клеток высокой плотности, для клональной культуры с плохим прикреплением, но не хочет, чтобы она была отсоединена от исходной точки роста, а также для культуры клеток миеломы и трансформированных клеток, трансфицированных ДНК в гибридомы.

4. Среда для культивирования клеток IMDM

Guilber и Iscove модифицировали среду Дульбекко в среду Iscove для культивирования эритроцитов и предшественников макрофагов. Среда для культивирования клеток IMDM содержит селен, дополнительные аминокислоты и витамины, пируват натрия и HEPES и заменяет нитрат железа нитратом калия. IMDM также способствует росту мышиных B-лимфоцитов, LPS-стимулированных B-клеток, гемопоэтических клеток костного мозга, T-клеток, и клетки лимфомы. IMDM является очень богатой питательными веществами культуральной средой и может использоваться для быстрого размножения клеток высокой плотности.

5. Среда для культивирования клеток RPMI-1640.

Разработано Муром и соавт. в Мемориальном институте Розуэлл-Парк в 1967 году, он предназначен для культуры лимфоцитов и содержит BSS + 21 вид аминокислот + 11 видов витаминов. В настоящее время он также используется для суспензионных культур клеток, таких как клетки млекопитающих, специальные гемопоэтические клетки, нормальные или злокачественно пролиферирующие лейкоциты и клетки гибридомы. Другие взрослые лимфоциты, такие как K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, клетки Т-клеточной лимфомы и эпителиальные клетки HCT-15, могут использоваться для сравнения.

6. Среда для культивирования клеток HamF10

1963 Дизайн ветчины, содержащий микроэлементы, может использоваться при низком содержании сыворотки, подходит для клонированной культуры. f10 подходит для диплоидных клеток хомяка и человека, особенно подходит для культуры клеток амниотической жидкости.

7. Среда для культивирования клеток DMEM/F12

Ham's F12 предназначен для клонирования клеток CHO при низкой концентрации в сыворотке и в настоящее время широко используется для анализа скорости образования клонов и первичной культуры. F12 также можно использовать с DMEM и другими объемами для получения высокой концентрации и состава разнообразных продуктов. Эта среда применялась для многих первичных культур, и ее труднее выращивать в культурах клеточных линий. Он также часто используется в качестве базовой среды для бессывороточных культур из-за богатого содержания питательных веществ и способности использовать меньше сыворотки.

8. Среда для культивирования клеток M199

Среда M-199 представляет собой среду для культивирования клеток с определенным химическим составом, разработанную Morgan et al. в 1950 году. Он содержит 53 компонента помимо BSS и представляет собой комплексную среду, используемую в основном для культивирования фибробластов куриных эмбрионов. Среда m-199 должна быть дополнена сывороткой для поддержки длительного культивирования. Его можно использовать для культивирования клеток многих видов, а также для культивирования трансфицированных клеток, и в настоящее время он широко используется в вирусологии и производстве вакцин.

9. Среда McCoy5A

Среда McCoy5A представляет собой среду для культивирования клеток, разработанную MeCoy в 1959 году для клеток саркомы и содержащую BSS и 40 других компонентов. Он может поддерживать рост различных первичных трансплантатов (таких как костный мозг, кожа, легкие и селезенка) и в основном используется для культивирования биопсии ткани, культивирования некоторых лимфоцитов и поддержки роста некоторых трудно культивируемых клеток, в дополнение к общему первичному культура клеток — например, фибробласты крысиной саркомы Дженсена, лимфоциты человека, HT-29, BHL-100 и другие эпителиальные клетки.

10. Среда для культивирования клеток L15

Культуральная среда L-15 подходит для культивирования быстро пролиферирующих опухолевых клеток и используется для культивирования опухолевых клеточных линий в отсутствие CO2. В этой культуральной среде используется фосфатная буферная система с улучшенным аминокислотным составом и заменой глюкозы на галактозу.

Как выбрать среду для культивирования клеток?

1. Вы можете проверить справочную литературу или проконсультироваться с ней при покупке клеточных линий. Вы также можете искать на веб-сайтах некоторых биологических компаний, таких как веб-сайт Invitrogen, на котором есть инструмент базы данных клеточных линий. Выберите интересующий вас тип клеток, и на экране появятся рекомендуемые среды, сыворотка, реагенты для трансфекции и т. д., иногда с оптимизированными этапами трансфекции, что очень удобно.
2. Вы также можете обратиться к обычным средам, используемым в других лабораториях, многие из которых подходят для культивирования нескольких клеток.
3. Выберите среду в соответствии с характеристиками клеточной линии и потребностями эксперимента. Например, линии клеток мыши в основном выбирают RPMI1640.
4. Используйте различные среды для культивирования клеток-мишеней и наблюдайте за их статусом роста. Вы можете использовать кривую роста, скорость образования колоний и другие показатели, чтобы судить по результатам эксперимента о выборе лучшей среды, что является наиболее объективным методом, но более утомительным.