Как предотвратить аэрозольное загрязнение в ПЦР-лабораториях

Применение и развитие технологии ПЦР (полимеразной цепной реакции) привело к получению более эффективных данных для диагностики заболеваний, особенно продвижение и применение флуоресцентной количественной ПЦР, которая значительно повысила чувствительность и точность теста. Однако с широким использованием этой технологии в лабораториях обнаружения патогенов проблема аэрозольного загрязнения в лабораториях ПЦР постепенно стала вызывать озабоченность. Чтобы эффективно избежать загрязнения аэрозолем ДНК / РНК лаборатории ПЦР, получить стабильные и надежные результаты испытаний, предотвратить ложноположительные результаты, лаборатория ПЦР должна установить строгие меры по борьбе с загрязнением и соответствующую систему мониторинга загрязнения для предотвращения загрязнения аэрозольным загрязнением после обнаружения аэрозоля. загрязнения, чтобы оперативно найти причину и соответствующее решение проблемы загрязнения.

Зонирование лабораторий

Лаборатория ПЦР должна быть разделена на четыре секции в соответствии с соответствующими правилами: секция подготовки реагентов, секция подготовки образцов, секция амплификации ПЦР и секция анализа продукта, причем первые две секции являются секции предварительной амплификации, а последние две секции являются секция после усиления. Зона предварительного усиления и зона постамплификации должны быть строго разделены и оборудованы вентиляцией и очисткой для формирования разницы давлений между секциями. Рабочий процесс, включая экспериментальные материалы, реагенты, бумагу для записей, ручки, чистящие средства и т. д., может протекать только из зоны преамплификации в зону постамплификации, т. е. из зоны подготовки реагентов → зона обработки образца → зона амплификации → продукт зоне анализа и не должен течь в обратном направлении. Категорически запрещается реверсировать поток в чистом коридоре, создавая различные перепады градиента давления между каждой секцией, соответствующей буферной комнатой и чистым коридором, чтобы поток воздуха совпадал с рабочим направлением.

Настройка элементов управления

Два отрицательных контроля (оба с использованием воды в качестве матрицы, один с образцом, участвующим в выделении нуклеиновой кислоты, и другой, не участвующий в выделении, добавляются только при настройке системы амплификации) готовят каждый раз перед проведением эксперимента, чтобы контролировать аэрозольное загрязнение в лаборатории и определить, есть ли загрязнение и чем оно вызвано, чтобы можно было принять меры для его предотвращения и устранения. Положительный контроль также должен быть установлен для контроля надежности и точности экспериментальных результатов.

Мониторинг лабораторных аэрозолей

Лабораторный воздух регулярно очищают с помощью бытового воздухоочистителя, при этом фильтр в очистителе погружают в воду, перемешивают, а перемешанную воду используют как пробу для соответствующих испытаний, чтобы быть в курсе загрязнения воздуха аэрозолями. Регулярно собирайте образцы ватных тампонов с внутренней части и поверхности пипеточных пистолетов, экстракторов, усилителей и других инструментов для тестирования, чтобы понять загрязнение экспериментальных инструментов.

Строгий рабочий процесс.

Каждая секция МКП оснащена своей рабочей одеждой, которую можно отличить по цвету, и соответствующую рабочую одежду необходимо менять при входе в каждую секцию; При этом вход в чистый коридор оборудован специальной обувью для помещения ПЦР, которую необходимо менять при входе, а перед каждой секцией оборудуются войлочные коврики. Лабораторный персонал в чистом коридоре может проходить только в направлении зоны подготовки реагентов в направлении зоны анализа результатов, и каждая секция оснащена разным персоналом для работы, если позволяют условия, чтобы не допустить, чтобы персонал каждой секции перемещаются друг вокруг друга.

Улучшение очистки и дезинфекции

Хорошая уборка и дезинфекция лаборатории — эффективный способ предотвратить аэрозольное загрязнение лаборатории. Объем лабораторной уборки включает в себя очистку рабочих поверхностей (тестовые стенды, сверхчистые стенды и шкафы для хранения и т. д.), поверхностей инструментов и оборудования (вращающиеся головки центрифуг, нагревательные блоки для выделения ДНК, слоты для образцов усилителей, пипетки). стержни для пипетирования, прорези генетических анализаторов и т. д.), бывшие в употреблении инструменты или посуда и т. д.

До и после начала эксперимента поверхности указанных выше зон и инструментов многократно протирают свежеприготовленным 10% раствором гипохлорита натрия, а затем очищают 75% этанолом для удаления остатков, и эксперимент можно проводить только после спирт испарился. Это может эффективно удалить различные загрязняющие вещества, прикрепленные к их поверхностям. В то же время лаборатория регулярно дезинфицируется ультрафиолетовым облучением.